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    上海通蔚生物|ELISAELISA檢測的正確性和準確性
    更新時(shí)間:2024-05-27   點(diǎn)擊次數:185次

    簡(jiǎn)單介紹在ELISA實(shí)驗中對不同類(lèi)型樣本的處理方法,ELISA實(shí)驗中正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的第一步。

    1、血漿

    ELISA實(shí)驗用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,標本采集后30min內4℃1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融,避免使用溶血或高血脂的標本。

    2、 細胞培養上清

     取細胞培養上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質(zhì)取上清。(-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。)

    3、 細胞裂解液

     (1)吸去培養板內的培養基,用yi酶消化細胞,加適量培養基將細胞從培養板上吹下來(lái)。(懸浮細胞可省略)

     (2)收集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養基,用預冷的PBS潤洗3次。

     (3)加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個(gè)孔的細胞量需要150~250μL      PBS重懸。

     (4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復凍融幾次,使細胞充分裂解。

     (5)4℃10000×g離心10min,除去細胞碎片取上清。(-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。)

     4、 血清

    血清是常用于ELISA檢測的一類(lèi)樣本,處理比較簡(jiǎn)單。用無(wú)熱原、無(wú)內毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一晚上,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清大程度的析出)。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。


    小結: ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,故應保證所有樣本均為澄清的液體,沉淀或懸浮物都應離心去除。為保證檢測的準確性,保存于-20℃或-80℃的樣本盡量在1~6個(gè)月內進(jìn)行檢測;4℃保存的樣本應在1周內進(jìn)行檢測。(保證樣本不含NaN3,NaN3會(huì )抑制HRP的活性,從而導致假陰性的結果。)

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